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# Espectrofotometría y colorimetría (ley de Beer–Lambert)

Una solución coloreada absorbe luz en proporción a la cantidad de sustancia que contiene. Medir esa luz absorbida da la concentración.

Actualizado 2026-11-01

## Datos clave

- Ley de Beer–Lambert: absorbancia A = ε × c × l (absortividad molar × concentración × longitud del paso de luz); con longitud fija, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración.
- Absorbancia A = log (I₀/I) = −log T; la transmitancia (T) cae de forma exponencial al subir la concentración, por eso el laboratorio lee absorbancia y no transmitancia.
- Colorímetro: usa filtros para la luz visible y un producto coloreado de reacción. Espectrofotómetro: usa un monocromador para una longitud de onda precisa, incluido el ultravioleta.
- El NADH absorbe a 340 nm y el NAD⁺ no: la mayoría de las pruebas enzimáticas (LDH, ALT, AST, CK, glucosa por hexocinasa) siguen la subida o bajada de la absorbancia a 340 nm.
- Concentración desconocida = (absorbancia de la muestra ÷ absorbancia del estándar) × concentración del estándar, siempre corregida con un blanco.

## En detalle

- 1. Fuente de luz → selector de longitud de onda (filtro o monocromador) → cubeta con la muestra → detector (fotocelda) → lectura.
- 2. El blanco (reactivos sin muestra) lleva la absorbancia a cero para que solo cuente la sustancia medida.
- 3. La longitud de onda elegida es la que más absorbe el producto coloreado (su color complementario): una solución azul se lee en la banda naranja–roja.
- 4. La ley se cumple solo en un rango: las muestras muy concentradas o turbias se desvían y deben diluirse.
- 5. Las proteínas absorben a 280 nm (triptófano y tirosina) y los ácidos nucleicos a 260 nm; la relación 260/280 revisa la pureza del ADN.
- 6. Métodos relacionados: fotometría de llama (emisión de luz del Na⁺ y el K⁺ en una llama; hoy casi reemplazada por electrodos ion-selectivos), fluorometría, turbidimetría y nefelometría (luz dispersada, para inmunoglobulinas y PCR).

**También llamado**
Ley de Beer–Lambert, Absorbancia, Fotometría de llama

## Correlación clínica

- La oximetría de pulso aplica el mismo principio: la hemoglobina oxigenada y la desoxigenada absorben distinto la luz roja e infrarroja.
- Los cooxímetros miden varias longitudes de onda para detectar carboxihemoglobina y metahemoglobina, que el oxímetro de pulso común lee mal.
- Muchas pruebas de química de rutina (glucosa, creatinina por reacción de Jaffé, bilirrubina, enzimas) son colorimétricas o espectrofotométricas.

## Enfermedades relacionadas

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## Póngase a prueba

Piense la respuesta y toque la pregunta para verla.

## ¿Qué dice la ley de Beer–Lambert?

La absorbancia es igual a absortividad molar × concentración × longitud del paso de luz; con longitud fija, la absorbancia sube en proporción directa a la concentración.

## ¿Por qué muchas pruebas enzimáticas se leen a 340 nm?

El NADH y el NADPH absorben a 340 nm y el NAD⁺ y el NADP⁺ no, así que el cambio de absorbancia sigue la reacción.

## ¿Para qué sirve el blanco en una prueba colorimétrica?

Pone el equipo en cero con los reactivos pero sin muestra, para que solo la sustancia medida sume absorbancia.

## ¿Cuál es la diferencia principal entre un colorímetro y un espectrofotómetro?

El colorímetro selecciona la luz con filtros en el rango visible; el espectrofotómetro usa un monocromador para longitudes de onda exactas, incluido el ultravioleta.

## ¿Qué formas de hemoglobina lee mal un oxímetro de pulso común de dos longitudes de onda?

La carboxihemoglobina y la metahemoglobina; se necesita un cooxímetro con más longitudes de onda.

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Fuentes: [Pulse Oximetry: MedlinePlus Medical Test](https://medlineplus.gov/lab-tests/pulse-oximetry/) (MedlinePlus, US National Library of Medicine, 2026); [Blood gases: MedlinePlus Medical Encyclopedia](https://medlineplus.gov/ency/article/003855.htm) (MedlinePlus, US National Library of Medicine, 2026); Textbook of Biochemistry for Medical Students, 6th ed. (Jaypee Brothers Medical Publishers (Vasudevan DM, Sreekumari S, Vaidyanathan K), 2011).

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