Bioquímica · Tema
Cromatografía !
La cromatografía separa las partes de una mezcla mientras fluye sobre un material que retiene cada parte con distinta fuerza.
Actualizado 2026-11-01
Datos clave
- Principio: una fase móvil (líquido o gas) arrastra la muestra sobre una fase estacionaria; las moléculas que se unen más débilmente avanzan más rápido y se separan.
- Reparto (papel, capa fina, gas–líquido, HPLC de fase reversa): separa por solubilidad entre dos fases; Martin y Synge recibieron el Nobel de Química de 1952 por ella.
- Intercambio iónico: separa por carga (analizadores de aminoácidos, HbA1c por HPLC). Filtración en gel (exclusión por tamaño): las moléculas grandes salen primero.
- Afinidad: un ligando específico (anticuerpo, sustrato, metal) retiene solo la proteína buscada, que luego se eluye; es el método más selectivo para purificar proteínas.
- Usos clínicos: HPLC para HbA1c y variantes de hemoglobina, perfil de aminoácidos, tamizaje de fármacos y tóxicos (cromatografía de gases o líquida con espectrometría de masas), tamizaje neonatal por espectrometría de masas en tándem.
En detalle
- 1. Cromatografía en papel y capa fina: el solvente sube por capilaridad; el Rf de cada mancha = distancia recorrida por la sustancia ÷ distancia recorrida por el solvente; los aminoácidos se revelan con ninhidrina (morado).
- 2. Cromatografía en columna: la muestra se carga arriba de una columna empacada y se recogen fracciones abajo.
- 3. Intercambio iónico: los intercambiadores de cationes (resina negativa) retienen moléculas positivas; la elución con sal creciente o cambio de pH las libera según su carga.
- 4. Filtración en gel: las perlas porosas atrapan a las moléculas pequeñas, que recorren un camino más largo; las grandes salen primero. También estima el peso molecular.
- 5. La HPLC impulsa la fase móvil a alta presión a través de partículas finas: separación rápida, nítida y cuantitativa.
- 6. La cromatografía de gases separa compuestos volátiles (alcoholes, fármacos, ácidos grasos) y suele acoplarse a espectrometría de masas (GC-MS) para identificarlos.
- También llamado
- Cromatografía en papel y en capa fina, Cromatografía de intercambio iónico, filtración en gel y afinidad, HPLC y cromatografía de gases
Correlación clínica
- Para confirmar un tamizaje de drogas positivo se usa GC-MS o LC-MS/MS, que identifican el compuesto exacto.
- La espectrometría de masas en tándem del tamizaje neonatal detecta los patrones de aminoácidos y acilcarnitinas de la PKU, la enfermedad de orina con olor a jarabe de arce y los defectos de oxidación de ácidos grasos.
- La HPLC separa HbA, HbA2, HbF y HbS y mide la HbA1c.
Enfermedades relacionadas
- Fenilcetonuria (PKU)
- Enfermedad de la orina con olor a jarabe de arce
- Enfermedad de células falciformes (anemia falciforme)
- Talasemias (α y β)
Relacionadas
- Proteínas plasmáticas y electroforesis
- Variantes de la hemoglobina (HbA, HbA2, HbF, HbS, HbC)
- Aminoácidos: estructura, carga y pKa
- Espectrofotometría y colorimetría (ley de Beer–Lambert)
- Centrifugación y ultracentrifugación
- Tamizaje neonatal
- Hemoglobina glicada (HbA1c)
Póngase a prueba
Piense la respuesta y toque la pregunta para verla.
En la filtración en gel, ¿qué moléculas salen primero y por qué?
Las más grandes, porque no entran en los poros de las perlas y recorren el camino más corto por la columna.
¿Qué propiedad separa las moléculas en la cromatografía de intercambio iónico?
Su carga neta, que depende del pH; se eluyen cambiando la concentración de sal o el pH.
¿Qué es el valor Rf en la cromatografía en papel o capa fina?
La distancia recorrida por la sustancia dividida por la distancia recorrida por el frente del solvente.
¿Qué cromatografía da la mayor selectividad para purificar una sola proteína?
La de afinidad, que usa un ligando como un anticuerpo o un sustrato que solo se une a esa proteína.
¿Qué técnica confirma la identidad de un fármaco hallado en una prueba de tamizaje?
La cromatografía de gases o líquida acoplada a espectrometría de masas (GC-MS o LC-MS/MS).
Información educativa, no es consejo médico. Ante un síntoma, consulte a un profesional de la salud.
Fuentes: The Nobel Prize in Chemistry 1952 - NobelPrize.org (NobelPrize.org (Nobel Prize Outreach), 2026); Toxicology screen: MedlinePlus Medical Encyclopedia (MedlinePlus, US National Library of Medicine, 2026); Plasma amino acids: MedlinePlus Medical Encyclopedia (MedlinePlus, US National Library of Medicine, 2026); Newborn screening tests: MedlinePlus Medical Encyclopedia (MedlinePlus, US National Library of Medicine, 2026); Textbook of Biochemistry for Medical Students, 6th ed. (Jaypee Brothers Medical Publishers (Vasudevan DM, Sreekumari S, Vaidyanathan K), 2011).
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